Методы определения витамина Е (биологические и химические методы)

Опубликовано 19 декабря 2018 | Рейтинг: 68

Биологические методы

Методика определения витамина Е является наиболее трудоемкой и сложной по сравнению с другими витаминами. Всесоюзная конференция по витаминам при Академии наук в 1934 году приняла следующую методику. На опыт берутся молодые, в возрасте 22-25 дней, непосредственно от материнской груди, самки крыс и переводятся на авитаминозную диету, состоящую из 18% казеина, 54% крахмала, 22% свиного топленого сала, 2% рыбьего жира, 4% смеси солей Менделя и Осборна, с ежедневной добавкой по 0,4-0,6 г сухих пивных дрожжей каждой крысе. По достижении самкой половой зрелости производится случка с нормальным самцом. После двукратной прекращающейся беременности самка может служить объектом для испытания на содержание витамина Е.

Доза испытуемого продукта, которая при однократном приеме в день спаривания вызывает исчезновение стерильности является единицей витамина Е (лечебной). Кроме лечебной единицы существует также профилактическая единица, которая представляет собой минимальную ежедневную дозу продукта, достаточную для предупреждения наступления авитаминоза на очищенной диете. Эта последняя единица значительно ниже лечебной единицы. Несмотря на большую сложность биологической методики, она являлась единственной, благодаря которой можно было вести изучение этого витамина, так как химических методов его определения долгое время не было. Лишь в самое последнее время были предложены химические методы его определения.

Химические методы

Учеными было установлено, что а-токоферол уже при комнатной температуре количественно окисляется хлорным железом, нитратом серебра, но особенно быстро и гладко окисление идет с хлорным золотом. Окислению подвергается одинаково и р-токоферол. В обоих случаях на окисление трех молей токоферола идет ровно два моля хлорного золота. Окисление лучше всего проводить в 80% спирте, ход же окисления оказалось очень удобно контролировать потенциометрически. Потенциометрическое титрование токоферолов ученые и предложили в качестве метода количественного их определения.

Токоферол дает своеобразную окислительно-восстановительную систему, однако обратимость процесса еще не достаточно доказана. Не только неизвестно, могут ли в живой клетке хиноидные продукты окисления токоферола посредством процессов восстановления обратно превращаться в токоферол (судя по неактивности продуктов окисления это маловероятно), но и при чисто химических воздействиях не удалось еще наблюдать полной обратимости. Восстанавливая продукт окисления а-токоферола цинковой пылью в ледяной уксусной кислоте, ученые получали вещество, содержащее на одну молекулу воды больше, чем а-токоферол. Они считают возможным, что этот продукт восстановления является хингидронным производным, соответствующим хиноидному соединению.

При выяснении вопроса, какие вещества, находящиеся в неомыляемой части масла, могут реагировать с AuCI3, ученые нашли, что каротин и каротиноиды влияют на результаты титрования. Однако в масле всех зерновых продуктов содержание каротиноидов менее 0,1%, а это количество вносит очень небольшую погрешность в титрование. В таких же объектах, как салат и др. где неомыляемая часть масла содержит примерно 0,3% каротиноидов, следует учитывать погрешность и вносить соответствующую поправку. При этом можно исходить из того расчета, что большинство каротиноидов требуют на 1 моль около 8 эквивалентов хлорного золота. При условии учета «каротиноидной погрешности» потенциометрический метод вполне пригоден для количественного определения токоферола. При этом надо, однако, отметить, что а- и р-токоферолы реагируют с АuС13 в одинаковых соотношениях, а так как биологическая активность этих двух изомеров различна, то поэтому не всегда можно ожидать точного соответствия полученных данных с биологическими определениями. Однако в целом ряде случаев это соответствие вполне удовлетворительное.